质粒DNA电泳图与基因组DNA电泳图的区别:
1、DNA显色带条数:质粒DNA电泳有3条带;而基因组DNA应该只有一条带或者两条带。
2、应用技术:质粒DNA电泳图与基因组DNA电泳图都是采用了凝胶电泳技术。
质粒DNA电泳会有三条带,最远的是线形DNA(lDNA): 质粒的两条链均断裂;线性分子;中间的是开环DNA(ocDNA): 质粒的一条链断裂;松弛的环状分子;共价闭合环状cccDNA: 质粒的两条链没有断裂;超螺旋。质粒跑出来必须是三条带,只要的是最前端的那条带,既CCCDNA。
基因组DNA电泳一般是1条带,虽然在你抽提过程中也会发生断裂,形成几十至几百kb的大片段。但是我们一般用1%的胶,无法区分不同大小的DNA,所以看起来像是一条带。如果配成0.6%的胶再加lamda hindIII marker,适当延长跑胶时间,就应该会出现几条带了。
电泳的迁移率,取决于核酸分子本身的大小和构型,分子量较小的DNA分子比分子量较大的DNA分子迁移要快些。这就是应用凝胶电泳技术分离DNA片段的基本原理。
扩展资料:
DNA电泳技术分离时影响其迁移速率的因素:
1、DNA的分子大小。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中蠕行,因而迁移得越慢。
2、琼脂糖浓度。一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。
3、DNA分子的构象。DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而开环双链DNA移动最慢。
4、电源电压。在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加,不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长,片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大。要使大于2kb的DNA片段有效分离所加电压不得超过5V/cm。
5、嵌入染料的存在。荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降低15%。
6、离子强度影响。电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶),电导率最小,DNA几乎不移动,在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。
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